ⅠNнуклеин кислотасыiкиришүү
Нуклеин кислотасы дезоксирибонуклеиндик кислотага (ДНК) жана рибонуклеиндик кислотага (РНК) бөлүнөт, алардын арасында РНК рибосомалык РНК(рРНК), кабарчылык РНК(мРНК) жана трансфер РНКсы (тРНК) ар кандай функцияларына жараша бөлүнөт.ДНК негизинен ядродо, митохондрияда жана хлороформдо топтолсо, РНК негизинен цитоплазмада таралган.ген экспрессиянын материалдык негизи катары, нуклеин кислотасын экстракция молекулярдык биология изилдөө жана клиникалык молекулярдык диагностикада өтө маанилүү ролду ойнойт.Нуклеин кислотасын экстракциялоонун концентрациясы жана тазалыгы кийинки ПТР, секвенирлөө, вектор куруу, ферменттерди сиңирүү жана башка эксперименттерге түздөн-түз таасирин тийгизет.
Ⅱ Нуклеин кислотасын алуу жана тазалоо ыкмасы
① Фенол/хлороформ экстракция ыкмасы
Фенол/хлороформ экстракциясы – бул ДНКны экстракциялоонун классикалык ыкмасы, ал негизинен үлгүлөрдү тазалоо үчүн эки түрдүү органикалык эриткичтерди колдонот, ДНКнын негизиндеги нуклеин кислотасын суу фазасында, органикалык фазадагы липиддерди жана эки фазанын ортосундагы белокторду эритет.Бул ыкма арзан баада, жогорку тазалык жана жакшы таасир артыкчылыктарга ээ.Кемчиликтери - татаал операция жана узак убакыт.
② Trizol ыкмасы
Trizol ыкмасы РНК алуу үчүн классикалык ыкма болуп саналат.Тризол ыкмасы хлороформ менен центрифугалоодон кийин суулуу фазага жана органикалык фазага бөлүнөт, мында РНК суулуу фазада эрийт, суулуу фаза жаңы EP түтүкчөсүнө өтөт, изопропанолду кошкондон кийин преципитация алынат, анан этанол менен тазалоо.Бул ыкма жаныбарлардын ткандарынан, клеткаларынан жана бактериялардан РНК алуу үчүн ылайыктуу.
③ Центрифугалык мамычаларды тазалоо ыкмасы
Центрифуга колоннасын тазалоо ыкмасы ДНКны атайын кремний матрицалык адсорбциялык материалдар аркылуу адсорбциялай алат, ал эми РНК жана протеин жылмакай өтүп, андан кийин нуклеиндик кислотаны бириктирүү үчүн жогорку туздун төмөн PH, нуклеин кислотасын бөлүп жана тазалоо үчүн аз туздун жогорку PH баалуу элюциясын колдонуңуз.Артыкчылыктары жогорку тазалоо концентрациясы, жогорку туруктуулук, органикалык эриткичтин кереги жок жана арзан баада.Кемчилиги, аны этап-этабы менен центрифугалоо керек, көбүрөөк операция кадамдары.
④ Магниттик шурулар ыкмасы
Магниттик мончоктор ыкмасы клетка кыртышынын үлгүсүн лизат аркылуу бөлүп, үлгүдөгү нуклеин кислотасын бошотуп, андан кийин нуклеин кислотасынын молекулалары магниттик мончоктун бетине атайын адсорбцияланат, ал эми белоктор жана кант сыяктуу аралашмалар суюктук.Клетка ткандарынын бөлүнүшү, нуклеин кислотасы менен магниттик мончоктун байланышы, нуклеин кислотасын жуу, нуклеин кислотасынын элюциясы ж.б. этаптары аркылуу акыры таза нуклеин кислотасы алынат.Артыкчылыктары жөнөкөй операция жана кыска убакытта колдонуу, баскычтуу центрифугалоонун кереги жок.Ал төмөн техникалык талаптарга ээ жана автоматтык жана массалык операцияны ишке ашыра алат.Магниттик мончоктун жана нуклеин кислотасынын өзгөчө айкалышы алынган нуклеин кислотасын жогорку концентрация жана тазалык менен түзөт.Кемчилиги - азыркы базар баасы салыштырмалуу кымбат.
⑤ Башка ыкмалар
Жогорудагы төрт ыкмадан тышкары, кайнатуу крекинг, концентрацияланган туз ыкмасы, аниондук жуугуч ыкмасы, ультра үн жана ферменттик ыкма ж.б.
Ⅲ Нуклеин кислотасын алуу түрү
Foregene дүйнөдөгү алдыңкы Түз ПТР платформасына, эки тилкелүү РНК изоляция платформасына ээ (ДНК гана + РНК гана).Негизги продуктыларга ДНК/РНК изоляция комплекттери, ПТР жана Түз ПТР реагенттери молекулярдык лабораториялык реагенттер сериясы кирет.
① Жалпы РНК экстракциясы
Жалпы РНК экстракция үлгүлөрүнө кан, клеткалар, жаныбарлардын ткандары, өсүмдүктөр, вирустар ж.б. кирет. Жалпы РНКнын жогорку тазалыгы жана жогорку концентрациясы жалпы РНК экстракциясы аркылуу алынышы мүмкүн, аны RT-PCR, чип анализи, in vitro которуу, молекулярдык клондоштуруу, Dot Blot жана башка эксперименттер.
Форгенге байланыштууРНК изоляция комплекттери
Жаныбарлардын жалпы РНК изоляциясынын комплекти--Ар кандай жаныбарлардын ткандарынан жогорку тазалыктагы жана сапаттуу жалпы РНКны тез жана натыйжалуу чыгарып алыңыз.
Клетканын жалпы РНК изоляциясынын комплекти--Жогорку тазаланган жана сапаттуу жалпы РНКны ар кандай культураланган клеткалардан 11 мүнөттө алууга болот.
Өсүмдүктөрдүн жалпы РНК изоляциясынын комплекти--Төмөн полисахарид жана полифенол камтылган өсүмдүк үлгүлөрүнөн жогорку сапаттагы жалпы РНКны тез бөлүп алыңыз.
Вирустук РНК изоляциялык комплект--плазма, сарысу, клеткасыз дене суюктуктары жана клетка маданиятынын супернатанттары сыяктуу үлгүлөрдөн вирустук РНКны тез бөлүп алыңыз жана тазалаңыз.
② Геномдук ДНК экстракциясы
Геномдук ДНК экстракция үлгүлөрү топурак, заң, кан, клеткалар, жаныбарлардын кыртыштары, өсүмдүктөр, вирустар ж.б. камтыйт. Геномдук ДНКны экстракция ферменттерди сиңирүү, ДНК китепканасын куруу, ПТР, антитело даярдоо, Вестерн блот гибриддештирүү анализи, ген чип, жогорку - өткөрүү ылдамдыгын секвенирлөө жана башка эксперименттер.
Форгенге байланыштууДНК изоляция комплекттери
Жаныбарлардын ткандарынын ДНК изоляциясынын комплекти--жаныбарлардын ткандары, клеткалары, ж.
Кан ДНК Миди топтому (1-5мл)--Антикоагулянттуу кандан (1-5мл) жогорку сапаттагы геномдук ДНКны тез тазалоо.
Buccal Swab/FTA Card ДНК изоляция комплекти--Баккан тампонунан/FTA картасынын үлгүлөрүнөн жогорку сапаттагы геномдук ДНКны тез тазалоо.
Өсүмдүктөрдүн ДНК изоляциясынын комплекти--Өсүмдүктөрдүн үлгүлөрүнөн (анын ичинде полисахариддер жана полифенол өсүмдүктөрүнүн үлгүлөрү) жогорку сапаттагы геномдук ДНКны тез тазалоо жана алуу
③ Плазмиддерди экстракциялоо
Плазмида ДНК рекомбинациясынын жалпы алып жүрүүчүсү болгон клеткалардагы тегерек чакан молекула ДНКсынын бир түрү.Плазмиддерди экстракциялоо ыкмасы РНКны алып салуу, плазмидди бактериялык геномдук ДНКдан бөлүп алуу жана салыштырмалуу таза плазмидди алуу үчүн протеинди жана башка аралашмаларды жок кылуу болуп саналат.
General Plasmid Mini Kit--Трансформация жана ферменттерди сиңирүү сыяктуу күнүмдүк молекулярдык биология эксперименттери үчүн трансформацияланган бактериялардан жогорку сапаттагы плазмиддик ДНКны тез тазалоо.
④ Башка экстракция түрлөрү, miRNA экстракциясы ж.б.
Жаныбарлардын miRNA изоляциясынын комплекти--Ар кандай жаныбарлардын ткандарынан жана клеткаларынан 20-200 нт миРНК, сиРНК, снРНКнын кичинекей РНК фрагменттерин тез жана натыйжалуу бөлүп алыңыз
Ⅳ Нуклеин кислотасын алуу жана тазалоонун натыйжасы үчүн талаптарs
① Нуклеин кислотасынын биринчи структурасынын бүтүндүгүн камсыз кылуу.
② Белоктордун, канттардын, липиддердин жана башка макромолекулалардын кийлигишүүсүн азайтат
③ Нуклеин кислотасынын үлгүлөрүндө ферментке тоскоол боло турган органикалык эриткич же металл иондорунун жогорку концентрациясы болбошу керек.
④ ДНКны экстракциялоодо РНК жана башка нуклеиндик кислотанын булгануусу жок кылынышы керек жана тескерисинче.
Посттун убактысы: 24-ноябрь, 2022-жыл
